期刊简介
《医学新知杂志》是由国家新闻出版总署批准，武汉大学中南医院和中国农工民主党湖北省委医药卫生工作委员会主办的综合性医学学术期刊，国内外公开发行；是中国学术期刊综合评价数据库统计源期刊、中国核心期刊（遴选）数据库收录期刊和美国化学文摘收录期刊。
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- 杂志名称：医学新知杂志
- 主管单位：中国农工民主党湖北省委员会
- 主办单位：武汉大学中南医院,中国农工民主党湖北省委医药卫生工作委员会
- 国际刊号：1004-5511
- 国内刊号：42-1220/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：知网收录(中), 国家图书馆馆藏, 维普收录(中), 上海图书馆馆藏
pEGFP-N1-hIL-1Ra真核表达质粒的构建及其在兔软骨细胞中的稳定表达
赵雪；叶程
关键词：骨关节炎, pEGFP-N1-hIL-1Ra, 质粒, 基因治疗
摘要：目的 构建含绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra,稳定转染兔软骨细胞后检测其表达.方法 通过RT-PCR扩增hIL-1Ra基因,并在两端添加HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点.将pEGFP-N1载体经BamH Ⅰ酶切后电泳鉴定,利用定向克隆技术将经Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切后的hIL-1Ra基因片段和pEGFP-N1载体经T4连接酶进行连接.重组的pEGFP-N1-hIL-1Ra在大肠杆菌DH5α感受态细胞内扩增,经过酶切电泳鉴定和DNA测序证明质粒构建是否成功.将构建正确的pEGFP-N1/hIL-1Ra重组质粒DNA由脂质体介导转染兔软骨细胞,RT-PCR检测基因的表达,western-blot检测蛋白的表达.结果 通过对重组质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra构建成功,开放阅读框架正确.稳定转染兔软骨细胞后,RT-PCR得到目的 基因片段,ELISA检测到目的 蛋白的表达.结论 利用DNA重组技术能成功将hIL-1Ra基因克隆人pEGFP-N1载体中,构建出真核表达质粒pEGFP-N1-hIL-1Ra,并获得了稳定表达目的 IL-1Ra的兔软骨细胞系,为骨关节炎的基因治疗研究奠定了实验基础.
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